(1)化學中和法:又稱中和劑法,是指在消毒劑與微生物作用到達規定時間的終點時,取樣加于適宜種類和濃度的中和劑中,將殘留消毒劑迅速中和,使其不再持續抑制或殺滅微生物的方法。本法同時含有稀釋作用效果(至少1:1稀釋,常用1:10稀釋),是普遍使用的方法。 對常用消毒劑,雖有一些中和劑介紹,但在實際應用中由于情況多變,效果不一定都理想。所以,在消毒試驗前仍應將擬用中和劑按試驗具體情況,經鑒定合格后再使用。
操作要點:
①對接觸消毒劑的微生物樣本,在達到規定作用時間,即刻取樣移入鑒定合格的中和劑溶液中;
②所用中和劑的濃度與容量應與鑒定試驗結果規定的相同;
③即刻混勻,并按規定時間吸取樣液進行隨后的培養檢測;
④在將樣本接種培養基以前的操作,應按規定時間內進行,以免微生物與中和劑或中和產物接觸過久。
(2)過濾沖洗法 將經消毒劑作用過的微生物樣本,立即加入適量稀釋液中混勻(通過適量稀釋,可減輕消毒劑的持續作用),并傾入裝有微孔濾膜的濾器內,接真空泵抽吸過濾(或加壓過濾)后,再加適量稀釋液沖洗,同時過濾,可去除殘留的消毒劑。多用于難以找到適宜中和劑的消毒劑試驗中,如以植物提取物制備的消毒劑。本除藥方法應按擬進行試驗具體情況,經鑒定合格后再使用。
操作要點:
①準備好裝有相應孔徑微孔濾膜的濾器;
②濾膜及濾器需先經滅菌處理;
③初次過濾后,應使用一定量對微生物無害的稀釋液進行沖洗,沖洗次數一般以洗凈消毒劑為準;
④最后一次沖洗、濾凈后,將微孔濾膜以無菌操作法取出,進行隨后的培養檢測。
(3)稀釋法 將經消毒劑作用過的微生物樣本,用稀釋液稀釋,降低殘留消毒劑濃度,以消除對微生物的抑制作用。但若稀釋過多,微生物濃度下降,可出現假陰性結果。本法可單獨使用,但更常見的是與其它方法同時使用。單獨使用時,一般多用于濃度系數較高的消毒劑(如醇類消毒劑)。本法應按擬進行試驗具體情況,經鑒定合格后再使用。
操作要點:
①對接觸消毒劑的微生物樣本,在達到規定作用時間后,即時以對微生物無害的稀釋液稀釋,稀釋比例隨試驗需要決定;
②電動混合或敲打振蕩,使之混勻;
③吸取稀釋樣液進行隨后培養檢測。
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